Tisuue_Prosessing

Tisuue_Prosessing Tisuue_Prosessing.hwp 목차 Tisuue Prosessing *Section* <Microtome> <Cryotome> or <Frozen section> Staining H&E Stain ① 탈 파라핀 과정 : Xylene5분→ Xylene5분(1, 2) ② 함수(hydration) : 100%→ 90%→ 80%→ 70%ETOH(3, 4, 5) ③ 염색(퇴행성) ④ 탈수 투명 과정 70%→ 80%→ 90%→ 100% ⑤ Mounting(봉입) Massons Trichrome method Solution Staining procedure Results Embedding =포매(블럭 만드는 과정) 본문 → 동물실에서 적출한 sample을 10% 포르말린(Formalin)에 넣고 약 하루동안 담궈 놓는다. (10% 포르말린 = 실제로는 4%이다. 왜냐하면 용기에 담겨있는 포르말린이 40%인데 이것을 100%로 가정하고 10배 dilution해서 쓰기 때문이다.) → Cassete에 Labeling을 하고 그 안에 sample을 넣은 후 미리 준비해놓은 사각용기(add D.W나 포르말린)에 Cassete를 넣는다. → 후에 Tisuue Prossesor를 12h정도 돌린다. *Section* <Microtome> 일반 근육 조직이 깎기 편하고 혈액, 뼈 등을 깎기 힘들 때 Hcl 1:1로 뿌려주면 좋다. (Hcl= 탈 칼슘작업이기 때문에 뼈가 아니면 사용x) → 깎은 smaple을 ETOH와 물을 섞은 용액에 담근다. (이때는 반쯤 말려있는데 두 번째 용기(45℃)에 말려있는 상태로 넣게되면 안펴질 경우가 있어 조직부분은 다 펴져있어야 한다.) → 슬라이드(slide)로 떠서 두 번째 용기(45℃)에 넣으면 펴진다. → 슬라이드(slide)를 뺀 후 세워서 물기를 빼준다. Stain start (만약 바로 staing을 안하려면 이전 과정에서 파라핀을 녹이지 않고 보관하면 된다.) → hot block(60-65℃)에 슬라이드(slide)를 올려서 파라핀(paraffin)을 녹여준다. → 파라핀(paraffin)을 제거하기 위해 Xylene에 담근다. → Xylene을 제거하기 위해 ETOH에 담근다. → ETOH을 제거하기 위해 물에 담근다. Stain → 물을 제거하기 위해 ETOH에 담근다. → ETOH을 제거하기 위해 Xylene에 담근다. -Mounting block → 현미경으로 사진 or 렉에 꽂아 보관한다. <Cryotome> or <Frozen section> = 급속냉각 (수술실과 같이 빠르게 봐야 할때) = 이용이 간단하나 저장이 용이하지 x Tissue-Tek (O.C.T Compound) Optimal Cutting Temperature 용액을 넣어서 급속 냉각한다. * 상온에서는 녹음. 본문내용 왜냐하면 용기에 담겨있는 포르말린이 40%인데 이것을 100%로 가정하고 10배 dilution해서 쓰기 때문이다.) → Cassete에 Labeling을 하고 그 안에 sample을 넣은 후 미리 준비해놓은 사각용기(add D.W나 포르말린)에 Cassete를 넣는다. → 후에 Tisuue Prossesor를 12h정도 돌린다. *Section* <Microtome> 일반 근육 조직이 깎기 편하고 혈액, 뼈 등을 깎기 힘들 때 Hcl 1:1로 뿌려주면 좋다. (Hcl= 탈 칼슘작업이기 때문에 뼈가 아니면 사용x) → 깎은 smaple을 ETOH와 물을 섞은 용액에 담근다. (이때는 반쯤 말려있는데 두 번째 용기(45℃)에 말려있는 상태로 넣게되면 안펴질 경우가 있어 조직부분은 다 펴져있어야 한다.) →